双缩脲反应

双缩脲反培雨检应是肽和蛋白质所特有的，而为氨基酸所没有的一种颜色反应。一般分子中含有两个氨基甲酰基(即肽键:-CO-NH-)的化合物与碱性来自溶液作用，生成意额能多市紫色或者蓝紫色的络合物。

• 中文名称 双缩脲反应
• 外文名称 biuret test
  biuret reaction
• 说明 肽和蛋白质所特有
• 类别 一种颜色反应
• 产物 紫色或蓝紫色络合物

定义

　　在碱帝河十县真基背都象学南性溶液(NaOH)中，双施画缩脲(H₂NOC-NH-空愿主汉践空CONH₂)与铜离子(Cu²⁺)作用，形成来自紫红色络合物(该物质的分子结构式见图)，该反应即双缩脲反应。

　360百科　铜溶液作用，就会形成王紫色或蓝紫色络合物。

　触朝早　注:除-CO-NH-有此反应外，酰胺基(-CO-NH₂)、亚甲基(-CH₂-)、亚氨基(含地不何伟米笑式联怕-NH-)、(-CS-CS-NH₂)等基团亦有此反应。值得注意的是，发生双缩脲反应，一般需要含有两个或两个以上的肽键(-CO-NH-)，或与它类款厂唱连干记员击他似的结构，二肽不能发生双缩脲反应 。例如，甘氨酰甘氨酰甘氨酸再(Gly-Gly-Gly，一种三肽，含有两个肽键谁罗假品地规争致)和双缩脲(biuret)结构相似，可以发生(positive response)双缩脲反应;而甘氨酰甘氨酸(Gly-Gly，一种二肽，含有一个肽键)，不能发生(negative respo般似企沉化觉加要派nse)双缩脲反应(图激1)。

鉴定

　　由于蛋白财秋怎质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能与拉图换认识消铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应，且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律，而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关，故可用双缩脲法测定蛋白质的含量(借助分光光度计可减买写小误差)。

　　双缩脲反应主要涉及肽键，因此受蛋白质特异性影响较小。且使用试剂价廉易得点育史绝温，操作简便，可测定的范围为1~10mg蛋白质，适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定，能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上。双烟谈主洲配具小审灯其缩脲法的缺点是精确度低、所需样品量大。干扰此测定的物质包括在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们践呀防井破万买领训持产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。

注意事项

　　双缩脲试剂由NaOH溶液(0.1g/mL)和CuSO4溶液(0.01g/mL)配制而成，配制比例为5:1。但是双缩脲试剂不用现读广设听开己协配现用，可以在蛋白质溶液中先加入NaOH营造碱性环境，再加入CuSO4。这是与斐林试剂不同的地方。